(Letöltés: Endotoxinok elemzése PDF formátum)
A bakteriális endotoxinok súlyos gyulladást vagy akár haláleseteket iselőidézhetnek, ha a véráramba, az agy-gerincvelői folyadékba vagy azintraokuláris folyadékba kerülnek. Emiatt az orvosi termékekendotoxinszintjének pontos kimutatása fontos része a sterilitásivizsgálatának. A Nemzetközi Szabványügyi Szervezet (ISO) mikrobiológiaimódszerekre vonatkozó új szabványa kitér a bakteriális endotoxinpirogének értékelésére.
Az endotoxinok olyan molekulák, amelyeket gram-negatív baktériumoktermelnek, és amelyek szennyezhetik az orvosi termékeket, valaminthaláleseteket idézhetnek elő. Az olyan baktériumok, mint az escherichia coli(E. coli) és a szalmonella a sejtnövekedés, a sejtosztódás és különösen asejtelhalás során választják ki az endotoxinokat, amelyek a lázat kiváltópirogének egyik típusát képviselik. Ezek a molekulák súlyoskövetkezményeket okozhatnak, ha a véráramba jutnak; az endotoxinoknakvaló túlzott expozíció súlyos gyulladásos reakciókat, szeptikus sokkot éshalált idézhet elő. A betegek biztonsága érdekében létfontosságú, hogy abefecskendezendő gyógyszereket és a beültethető orvostechnikaieszközöket használat előtt endotoxin vizsgálatnak vessék alá.
Az orvostechnikai eszközök a különböző állapotok diagnosztizálásának,nyomon követésének és kezelésének alapvető eszközei. Fontosazonosítani a mikrobiológiai szennyeződés lehetséges forrásait, és felmérnia betegeket fenyegető kockázatot. Ezeknek az eszközöknek a biztonságaés megfelelő működése azonban veszélybe kerülhet, ha nem megfelelőentervezik, gyártják, tartják karban és validálják őket.
Az endotoxin validációs vizsgálat a vizsgálati módszer megbízhatóbbértékelését teszi lehetővé. Röviden, a gátló/erősítő típusú vizsgálatokattöbb hígítás/hígítószer alkalmazásával egyidejűleg végzik.Azeredményeket ezután kiértékelik, hogy megállapítsák, melyik módszer adjaaz ideális spike-visszanyerési százalékhoz és a minta pH-értékéhezlegközelebb álló eredményeket.
A validálás több szempontból is fontos:
- Pontosság: A validálás biztosítja a vizsgálati módszer pontosságát, ésazt, hogy megbízható eredményeket adjon. Ez döntő fontosságú azendotoxinvizsgálat során, mivel pontatlan vizsgálati eredmények esetén téves következtetéseket vonhatnak le az endotoxinok jelenlétére vagyhiányára vonatkozóan.
- Megbízhatóság: A validált módszer megbízható, és ugyanazon feltételekmellett következetesen ugyanazokat az eredményeket képes produkálni.Ez fontos a teszteredmények időbeli konzisztenciájának biztosításaszempontjából.
- Robusztusság/rugalmasság: A validálás a vizsgálati módszerrobusztusságát/rugalmasságát értékeli, ami azt jelenti, hogy aparaméterek kis eltérései nem befolyásolják a vizsgálati módszert. Ezbiztosítja a vizsgálati módszer stabilitását, vagyis azt, hogy ellenálljon avizsgálati környezet vagy eljárás kisebb változásainak.
- A szabályozási követelmények betartása: A validálás gyakranszabályozási követelmény. A szabályozó hatóságok megkövetelik avalidálást annak érdekében, hogy az alkalmazott vizsgálati módszerek atervezett célra alkalmasaklegyenek, és pontos és megbízhatóeredményeket nyújtsanak.
- Kockázatcsökkentés: A validálás segít a vizsgálati módszerrelkapcsolatos kockázatok meghatározásában és csökkentésében.Lehetővé teszi a vizsgálati eredmények pontosságát vagymegbízhatóságát befolyásoló potenciális problémák azonosítását,ezáltal biztosítja az ilyen problémák megelőzésére irányuló proaktívintézkedések foganatosítását.
Bármilyen típusú mintát vizsgálhatunk: alapanyagokat, késztermékeket,dializált mintákat, orvosi és sebészeti eszközöket. A Medistri a kinetikuskolorimetria módszerét alkalmazza.
A kinetikus kolorimetria módszere az endotoxinvizsgálat egyik típusa,amely az endotoxinnak és a lizátum közötti reakció során a kromogénszubsztrátból felszabaduló kromofór által kifejlesztett szín mérésén alapul.Ez a módszer a fotometrikus vizsgálatok egyik típusa.
Az eljárás során a mintát lizátummal keverik össze. Endotoxinokjelenlétében a lizátum reakcióba lép az endotoxinnal, ennek hatására pediga kromogén peptidből kromofór szabadul fel. A reakcióelegy előremeghatározott abszorbanciájának eléréséhez szükséges reakcióidőt egymikrolemez-olvasó készülékkel rögzítik. Ez az eljárás a kromogén végpontmódszerrel vagy kromogén kinetikus módszerrel is elvégezhető. Akromogén kinetikus módszer alapja a szín kifejlődés mérése a vizsgálatimintában különböző időközönként a színezett anyagot tartalmazó LAL-reagens hozzáadása után.
Az orvostechnikai eszközökre vonatkozó európai jogszabályok a orvostechnikai eszközökről szóló rendeletet (Medical Device Regulation,MDR), illetve az e rendeletet 2021-ben felváltó orvostechnikai eszközökrőlszóló irányelvet (Medical Devices Directive, MDD). Ezt a változtatást azeurópai unió polgárai egészségének és biztonságának védelme érdekébenvezették be annak biztosítása érdekében, hogy a gyártók biztonságostermékeket állítsanak elő az európaiak számára. Ebbe beletartoznak magukaz eszközök, valamint az orvostechnikai eszközök szoftverei (medicaldevice software, MDS) is.
Az endotoxinok analízisének validálási követelménye az idők soránfolyamatosan fejlődött. Az endotoxinok meghatározására kezdetben atőrfarkú rák amöbocitáinak lizátumára (Limulus Amebocyte Lysate, LAL)alapozott vizsgálatot ajánlották, és erre vonatkozóan 1980 januárjában aszövetségi közlönyben (Federal Register) iránymutatásokat adtak ki. Ezeketaz iránymutatásokat 1983-ban felülvizsgálták és újra kiadták.
Az orvostechnikai eszközökről szóló rendelet (MDR) megjelenésévelazonban szigorúbb követelmények léptek hatályba. Ezt követőenbizonyítani kell azt is, hogy a vizsgálati minta nem akadályozza azendotoxinok kimutatását. Ez a kinetikus vizsgálati módszerek esetében apozitív termékkontrollal (más néven a spike-visszanyeréssel), agélképződésen alapuló gél-koagulációs (gel-clot) módszeresetében pedigkülön gátlási és fokozási vizsgálattal történik.
👉 Az endotoxin-analízis validálásának megkövetelése felé történőelmozdulás az orvostechnikai eszközök és gyógyszerek biztonságának éshatásosságának biztosítására irányuló szélesebb körű tendencia része. Azendotoxin-szintek pontos mérhetősége a cél, ami abetegbiztonságszempontjából döntő fontosságú.
Az Egyesült Államok Gyógyszerkönyve egy új, < 86 > fejezetet javasolt,amely további információkat tartalmaz a nem állati eredetű reagensekfelhasználásával végzett bakteriális endotoxin vizsgálatokról (BacterialEndotoxins Test, BET). A dokumentumot a nyilvános konzultációtmegelőzően általános közleményként tették közzé.
Ezt az új szabványt a bizottság 2023-ban javasolta. Ez annak értékelésénalapult, hogy az állatokból származó reagenseket használó jelenlegiendotoxinvizsgálati módszerek mellett lehet-e nem állati eredetűreagenseket is alkalmazni.
Az új fejezet számos reagens, köztük a rekombináns C faktor (rFC) és arekombináns kaszkádreagensek (rCR) használatára vonatkozó módszereket is tartalmaz. Mindaz új, mind pedig a már ismertbiogyógyszerészeti termékek gyártói számára információt nyújt arról, hogymiként építhetik be ezeket a módszereket a minőségvizsgálatokba.
Az alábbiakban a javasolt Bakteriális endotoxinok vizsgálata a „BacterialEndotoxinsTest Using Recombinant Reagents” (rekombináns reagensekfelhasználásával) című, <86> fejezetben szereplő információk találhatók:
A beszállító elsődleges validációs csomagjának felülvizsgálata afelhasználó feladata.
A termékek vagy anyagok vizsgálatára való alkalmasság igazolása(hivatkozás az <1226> Verification of Compendial Procedures (Összetetteljárások ellenőrzése) c. fejezetre )
Előfordulhat, hogy a szabályozó hatóságok kiegészítő adatokat kérnek azengedélyezés előtt.
A Nemzetközi Szabványügyi Szervezet (ISO) közzétette új szabványát:Egészségügyi termékek sterilizálása-Mikrobiológiai módszerek-3. részBakteriális endotoxin-vizsgálat (ISO 11737-3:2023). A dokumentum abakteriális endotoxinok vizsgálatára vonatkozó követelményeket ésútmutatásokat fogalmazza meg.
👉 Ide tartoznak azok a termékek, amelyek a rendeltetésszerű használatukvagy a címkéjükön szereplő jelölés vagy mindkettő alapján nem-pirogénnekminősülnek.
Az ISO 11737-3:2023 általános kritériumokat fogalmaz meg azegészségügyi termékekben, összetevőkben vagy nyersanyagokban lévővagy azokon található bakteriális endotoxinok meghatározására abakteriális endotoxinok vizsgálatának (BET) módszereivel, amöbocitalizátum reagensek felhasználásával. Ez csak a Limulus polyphemus vagy aTachypleus tridentatus plazmájából nyert amöbocita lizátum reagenseithasználó Gram-negatív BET-re vonatkozik.
E szabványok betartásával a gyártók bizonyítani tudják, hogy orvostechnikaieszközeik megfelelnek a különböző piacok és szabályozó hatóságokbiztonsági és teljesítménykövetelményeinek.
🎯 Ha többet szeretne megtudni a Medistrinél végzett endotoxin-analízisről, kattintson ide, vagy vegye fel a kapcsolatot közvetlenül amunkatársainkkal a contact@medistri.swiss címen.
- A Medistri csapata
#Medistri